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標題: 「專家共識」干细胞在整形修复美容领域研究和临床試驗的專家共識 [打印本頁]

作者: admin 時間: 2024-6-3 16:56
標題: 「專家共識」干细胞在整形修复美容领域研究和临床試驗的專家共識
中國醫師协會整形美容醫師分會干细胞和再生醫學學组

曩昔十年見證了干细胞根本生物學和临床轉化钻研的飞速成长。干细胞分手、分解和纯化，干细胞特征、功效保持和不乱扩增技能方案不竭完美，临床實驗大量出現。摸索干细胞在整形修复美容范畴的體系化、科學化、規范化和尺度化，和平安有用利用路径的共鸣，已具有扎實的科學理論和實践根本。本共鸣约请國表里干细胞根本钻研的一線專家和整形修复美容外科范畴干细胞钻研的前沿临床钻研專家配合撰写，告竣的每項報告和举薦均最少有3位相干范畴的專家总结。因為今朝干细胞范畴钻研纷纷而繁杂，本共鸣不成能解决所有的迷惑，旨在沟通和提高我國整形修复美容范畴從事干细胞根本和临床钻研事情者的認知，以期更好地鞭策干细胞的临床轉化利用钻研。但愿本共鸣的颁發，可以或许激起该范畴将来的高質量钻研去渐渐摸索息争决在本共鸣中未解决的相干問題。

1 、总則

本共鸣所指干细胞是一類同時具有自我更新能力和分解潜能的细胞；可以来自胚胎组织，也能够来自成體组织；自體或异體，體外分手、纯化浓缩、培育、傳代或是不培育、不傳代，新颖或冻存。

1.1展開干细胞临床前钻研和临床钻研的请求

2015年，國度衛生和規划生养委員會（現國度衛生康健委員會）和國度食物藥品监視辦理总局（現國度藥品监視辦理局）持續公布《干细胞临床钻研辦理法子（試行）》[1]、《干细胞制剂質量节制及临床前钻研引导原則（試行）》[2]和《關于展開干细胞临床钻研機構存案事情的通知》[3]三項政策，標記着干细胞轉化临床钻研的相干政策落地。干细胞临床前钻研和临床钻研要在遵守這三項政策的原則引导下举行。

1.1.1 干细胞临床前钻研请求

必需严谨設計钻研規划、記實陈述必需翔實可追溯、确保實驗合适科學和醫學的请求，為干细胞临床實驗钻研供给必需具有的充實科學根据。所用细胞请求與临床细胞一致。细胞产物的出产和加工必需在知足藥品出产質量辦理規范（good manufacture practices, GMP）的情况下举行；别的，還必要對细胞群，细胞基因组不乱性、成/致/促瘤性、异样分解及生物學功效和效應举行阐發判定。動物模子的選擇遵守削減（reduce）、優化（refine）和取代（replace）三個原則。有用性钻研設計原則请求：摹拟临床實驗前提，足够的统计成果，符合足够的比照、随機法、盲法，創建剂量效應瓜葛等。平安治療掉髮產品,性钻研包含：细胞生物散布、异位异样散布與分解及對其他长短時間的可能毒副感化的监测。

1.1.2 干细胞临床钻研的请求

干细胞临床钻研機構需合适國度请求；干细胞临床钻研項目理當在已完成存案的機構施行；干细胞临床钻研必需具有充實的科學根据，應掂量受試者和公家康健预期的受益及危害，预期的受益應跨越可能呈現的侵害。临床钻研方案理當兆活果實,合适新版《藥物临床實驗質量辦理規范》[4]的请求，干细胞制剂合适《干细胞制剂質量节制及临床前钻研引导原則（試行）》[2]的请求，同時經由過程機構的伦理审查和學術审查并提交國度衛生康健委員會和國度藥品监視辦理局存案。钻研竣事後，理當對受試者举行持久随访监测，评價干细胞临床钻研的持久平安性和有用性。

1.2 干细胞及其相干产物制备機構的请求

⑴干细胞及其相干产物制备機構（如下简称機構）扶植應有合适尺度的 GMP 出产車間：总體万级，局部百级；合适YY0033 第三類醫療器械出产尺度；结構合适藥品GMP 请求；每台仪器的利用都有响應的尺度操作流程（standard operation procedure, SOP）。

⑵機構應創建合适 GMP 请求、完备的干细胞制剂制备質量辦理系统，并設立自力的質量辦理部分，靜脈曲張特效藥,實行質量包管和質量节制的职责。機構應按照每種干细胞制剂的特征及其制备工藝举行危害评估。

⑶機構應創建公道的質量辦理计谋，指定详细的干细胞制剂制备辦理卖力人、質量辦理卖力人和質量授权人。同時創建职員、装备辦理档案，并對相干职員完成專業常識、平安防護、應急预案的培训和继續教诲，對装备举行規划性校驗和保護，确保制剂出产的正确性。

2 、在整形修复美容范畴利用钻研常見的干细胞類型

2.1 骨髓間充質干细胞

骨髓間充質干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs）是從骨髓组织中分手获得的一類間充質干细胞，Friedenstein 等[5]于1976年初次報导。BMMSCs 可贴壁發展，具备向中胚层组织细胞分解的能力。几近所有的造血细胞概况標記物（CD3四、CD1四、CD45 等）在BMMSCs中呈阴性表达[6- 7]，BMMSCs 概况表达的標識表記標帜物包含整合素（CD4九、CD2九、LFA- 3），免疫球卵白超家属（CD5四、CD102），血管细胞黏附份子（CD10六、 CD4四、CD166）等[8- 10]。BMMSCs 重要来历于骨髓液，可經由過程髂前上棘穿刺抽取，也可自胫骨、股骨、胸骨等骨中获得。抽取的骨髓液經由過程密度梯度離心法、全骨髓培育贴壁挑選法、流式细胞仪分選法和免疫磁珠法等可挑選出巨细平均、纯度相對于较高的 BMMSCs[11]。BMMSCs的扩增速率极快，短期的培育後便可获得大量的细胞。

2.2 脂肪来历干细胞

1973 年，Poznanski 等在脂肪中發明了雷同于成纤维样的细胞，在體外也能连结代谢活性[12]；2001年，Zuk等證明這些细胞中存在間充質干细胞并定名為脂肪来历干细胞（adipose- derived stem cells，ADSCs）[13]。其表达基質细胞相干標記物（CD2九、CD44）、間充質细胞標記物（CD7三、CD90），根基不表达造血源性细胞標記物 CD45 及MHCⅡ相干卵白 HLA- DR[13- 14]。從脂肪组织中分手 ADSCs 的重要法子是胶原酶消化法，操作简略，产量较高；别的另有组织块贴壁法、吸附柱法、直接離心法、機器振荡法等，但效力较低[15- 17]。在用胶原酶處置脂肪组织後，采集的底层细胞团被称為脂肪血管基質片断（stromal vascular fraction，SVF），是一類包含ADSCs、脂肪前體细胞（脂肪祖细胞）、周细胞、内皮细胞、内皮祖细胞、单核/巨噬细胞和造血干细胞等在内的异質性细胞群，也具备促成组织再生的功效[18- 19]。

2.3 脐带間充質干细胞

脐带間充質干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells, UCMSCs）是一種自脐带分手的間充質干细胞，最先在 21 世纪初被報导[20]。脐静脉内皮、脐带 Wharton's 胶質和血管四周组织中都可分手得到 UCMSCs[21- 23]。UCMSCs 具备典范的間充質干细胞概况標記物表达特色，CD2九、CD4四、CD10五、CD16六、OCT- 4 和c- myc 均呈阳性表达，CD34 和 CD14 均呈阴性表达[24]。UCMSCs 具备持久自我更新、高扩增性和表型不乱性[25]。今朝還没有公認的分手 UCMSCs 法子，利用较多的法子有组织块贴壁法和酶消化法。UCMSCs 的来历是醫療烧毁物脐带，伦理上较易得到知情赞成授权收受接管操纵，受光临床轉化利用的青睐[26]。

2.4 毛囊間充質干细胞

毛囊間充質干细胞（hair follicle mesenchyma stem cell, HFMSCs）散布在两個部位：毛囊球部的真皮乳頭（dermal papilla, DP）和毛囊球部最外层的真皮鞘（dermal papilla, DS）内[1- 2]。經由過程周期性地在 DP 和 DS 間迁徙，實現随毛發周期的 DP 和 DS 功效性重组[3- 4]。比拟于来历于骨髓、脂肪、脐带等组织的間充質干细胞， HFMSCs 具备来历丰硕、取材简略、對機體創伤小且無春秋限定等长處。HFMSCs 也具备成骨、成脂和成软骨潜能，概况阳性標識表記標帜物有 CD4四、CD7三、CD90、CD105[5- 7]。HFMSCs 的分手是用中性卵白酶 + 胶原酶消化皮脂腺下2 妹妹如下的毛囊下端，扩增培育後經由過程概况標記物分選出HFMSCs[8- 9]。因為 HFMSCs 在體外培育進程中其引诱能力逐步损失，以是今朝關于保持HFMSCs干细胞特征的法子主如果3D培育，包含悬滴法、ECM 法、LBL 法等[9- 12]。

2.5 牙髓間充質干细胞

牙髓間充質干细胞（human dental pulp stem cells, hDPSCs）作為人體牙髓组织中存在的一種間充質干细胞，與其他間充質干细胞同样具备很强的增殖力、自我更新和多向分解能力，同時還具备免疫调理功效和潜伏的组织再生特征[27- 28]。hDPSCs 與BMMSCs 具备類似的免疫表型，一样表达 CD7三、CD90 和 CD105，不表达 CD1四、CD34 和 CD45 等概况標識表記標帜，但hDPSCs具备更高的增殖率和克隆構成能力[27]。迄今為止，已分手和判定出8種分歧的hDPSCs，此中利用最為遍及的是 hDFSCs，其分手培育的法子與其他组织間充質干细胞法子雷同[29]。

2.6 胚胎干细胞、引诱性多功效干细胞等其他干细胞

胚胎干细胞（embryonic stem cells, ESCs）是一種從初期胚胎或内细胞团中分手出来的万能干细胞，可以向3個胚层分解，在體内或體外情况都可被引诱分解為機體几近所有细胞類型[30]。ESCs表达的特异性標記物包含 SSEA- 三、SSEA- 四、TRA- 1- 60、TRA- 1- 8一、TRA- 2- 49/6E 和 Nanog[31]。但是胚胎干细胞的利用仍存在危害和伦理問題。引诱性多功效干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）是操纵哺乳動物的成體细胞，由人工轉入 Oct四、Sox二、c- Myc、Klf4 四種轉錄因子，使成體细胞履行去分解路子而構成雷同于胚胎干细胞的多能干细胞[32]。iPSCs 與 ESCs具有類似的再生能力，理論上可以分解為所有成體器官、组织，其概况標記物與未分解的 ESCs雷同。比拟ESCs，iPSCs面對的伦理品德争议较小，但iPSCs引诱技能面對着引诱效力低，用于治療存在持久肿瘤危害等挑战[33- 34]。其他的干细胞還包含胎盘、羊水和尿液等来历間充質干细胞，這些细胞也具备多向分解能力和较高的增殖能力。

3 、干细胞保留的規范

高質量不乱保留干细胞資本是干细胞利用中的關頭环节，低温冷冻保留技能為干细胞的運输、持久存储、活性和功效的保留供给了相當首要的包管。钻研表白组织和细胞固然可以在-196 ℃低温下持久保留，但却易在降暖和复温進程中受溶液冻结、熔化和溶液浸透压變革等身分的感化而产生毁伤[35]。冷冻毁伤凡是缘由是在- 60~0 ℃细胞内冰晶構成，在對细胞造成直接毁伤的同時致使细胞表里酸碱度、浸透压等产生扭轉。經由過程参加冷冻庇護剂和步伐性降温，可削減细胞内冰晶構成，提高细胞活性。冷冻庇護剂按照其是不是穿透细胞膜凡是分為两大類型，即浸透性冷冻庇護剂和非浸透性冷冻庇護剂[35]。浸透性冷冻庇護剂多為小份子中性物資，其感化為弱化水结晶進程，削減對细胞布局和功效的粉碎，重要包含甘油、二甲基亚砜（DMSO）、丙二醇、乙二醇、乙酰胺、甲醇等。非浸透性庇護剂多為大份子物資，經由過程低落溶質浓度来削減低温冻存對细胞的毁伤，重要包含海藻糖、聚乙二醇、羟乙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、白卵白等。分歧種干细胞的低温生物特征不不异, 應答冷冻毁伤的能力各有分歧。是以，利用独有的最好低温保留法子保留分歧的干细胞才能确保复温後的干细胞“平安 - 有用”[36- 38]。

四、整形修复美容范畴干细胞的重要临床钻研標的目的

4.1 在增长组织血管化和抗纤维化中的利用

组织血運停滞是整形外科常處置的問題，干细胞可被用于醫治皮瓣缺血及其他组织缺血性疾病。临床前@钻%O5323%研已證%75168%明@，干细胞有促成细胞迁徙、成管的能力，可改良皮瓣血液轮回，促成皮瓣成活[39- 40]。在缺血的手部移植皮瓣内及四周组织中打针SVF，可察看到皮瓣血運有较着改良，手功效改良[41]。干细胞鄙人肢缺血疾病中也有利用，在紧张下肢缺血的病例中，經由過程肌肉内打针 CD133+ 的干细胞，可刺激新血管天生[42- 43]。在瘢痕醫治方面，BMMSCs 可用于预防肥厚性瘢痕患者移植後皮膚移植物的紧缩[13]。别的，皮下局部利用BMMSCs 可较着改良中、重度萎缩性痤疮瘢痕，且無较着副感化[14]。另有钻研利用 ADSCs 醫治體系性硬化症的指端溃疡，發明可促成創面愈合，改良痛苦悲伤症状和手功效[44]。

4.2 在創伤後皮膚再生與創面愈合中的利用

創伤居疾病谱首位，此中皮膚缺损最為高發。同時，糖尿病、脉管疾病等激發的皮膚溃疡創面也是高病發[45]。比年来發明干细胞可經由過程直接分解、旁排泄發展因子等多個路子介入皮膚再生。在外伤致使的急性皮膚全层缺损中，局部打针 ADSCs 可收缩創面愈應時間，削減继發性瘢痕挛缩、色素冷静和增生的产生[46]。在糖尿病足、慢性創面等多種難愈性創面的醫治中，在創面边沿及基底打针干细胞可有用促成组织血管复活、加快肉芽组织構成、改良组织血供，同時促成創缘角質構成细胞的增殖，加快創面再上皮化進而促成愈合[47- 48]。相较于無毛囊的皮片，带有毛發的皮膚移植物因含有毛囊干细胞和更多的表皮干细胞，在促成慢性溃疡愈合中可到达更好的结果[49]。皮膚扩大中，局部的张力可引诱血液轮回中干细胞向扩大皮膚局部迁徙，在局部定植後經由過程分解和合成發展因子促成扩大皮膚组织再生[50]。還有钻研證明，干细胞在促成光老化和朽迈後的皮膚再生年青化等方面有顯著结果[51]。

4.3 在脂肪移植後再生中的利用

脂肪移植是软组织萎缩和缺损修复的首要法子，但移植的脂肪组织因為缺少血供與發展因子，常呈現较高的吸取率及纤维化、钙化等征象，影响其療效[52]。利用干细胞辅助脂肪移植（cell- assisted lipotransfer, CAL）後脂肪细胞成活率提高，组织布局形態更好，并發症更少[53- 55]。在乳房脂肪填充中，参加干细胞可以提高移植後脂肪的成活率，削減脂肪打针後纤维化、囊肿等并發症的产生率，同時未察看到脂肪异样增殖、肿瘤等并發症的产生[55- 56]。此外，在半面萎缩的醫治中，也察看到利用 CAL可提高脂肪的成活率[57]。

4.4 在毛發再生中的利用

脱發是困扰現代人的首要問題，除與雄激素代谢物二氢睾酮相干的代谢停滞有關，也與毛囊四周血管化削減和發展因子落空均衡有關[58]。干细胞排泄的血管内皮發展因子、肝细胞發展因子、胰岛素样發展因子、血小板衍生發展因子等多種细胞因子[59]，一方面可调控繁杂的毛产生长周期，另外一方面可促成毛囊四周的血管化[60]，引诱毛囊真皮乳頭增殖及调控毛囊由停止期進入生持久，促成毛产生长、毳毛發育為终毛[61- 62]。在脱發區域皮膚内打针ADSCs和 SVF，可察看到打针區域毛發密度有所增长、毛發直径顯著增粗[63- 64]。ADSCs 的前提培育基也具备促成毛發再生的结果，屡次打针後结果與非那雄胺療效靠近[65]。自體BMM牙齒美白, SCs及自體HFMSCs也被報导在醫治難治性斑片状脱發和雄激生性脱發中有顯著感化[66]。

4.5 在骨與软骨再生中的利用

今朝针對因創伤、肿瘤、天赋畸形等致使的骨和软骨缺损的修复，临床上重要采纳的是自體组织移植、异體组织移植和替換物植入等法子，但利用范畴和醫治结果有必定的局限性[67- 69]。BMMSCs 和 ADSCs 是在骨和软骨缺损临床钻研利用中最多見的干细胞類型，向骨、软骨的局部缺损打针BMMSCs或ADSCs可促成组织修复再生[70- 72]。将干细胞與生物支架質料复合，不但可提高干细胞操纵效力，并且支架質料的引入也為干细胞再生供给更有益的微情况，使其具备更不乱的布局和更優化的功效[73]。枢纽關頭腔内打针 ADSCs、BMMSCs 或 hDPSCs，可以經由過程调理局部炎症、促成软骨再生修复從而減缓痛苦悲伤、节制枢纽關頭炎的成长[74]。临床钻研顯示采纳自體干细胞醫治骨缺损是平安有用的，還没有钻研顯示产生炎症、傳染、组织過分發展或肿瘤产生等[75]。

五、干细胞衍生物的利用钻研

干细胞從属产物包含干细胞前提培育液（conditioned medium, CM）、促成组织再生的發展因子（growth factor, GF）、分手自血液的富血小板血浆（platelet rich plasma, PRP）等[76- 78]。此類产物重要地有用成份是干细胞排泄的發展因子，利用法子包含凝胶状制剂涂抹創面、局部组织内打针填充和液體产物在局部组织内的打针。經由過程在老化的皮膚中弥补發展因子，可提高皮膚經由過程各類活性因子促成真皮层内纤维母细胞的增殖能力，修复老化的胶原纤维與弹性纤维，還原肌膚弹性并削減皱纹。在脱發醫治中局部打针此類产物可促成毛囊的活化和再生。PRP 類产物一般可在临床機構直接收集获得；CM和 GF 類产物則必要由合适GMP尺度的專業干细胞制剂出产機構或制藥機構举行制备。干细胞的另外一類首要的衍生产物外泌體（exosome）比年来获得了遍及存眷。外泌體是機體内细胞經由過程胞吞感化構成多泡小體後，通细致胞膜交融排泄到细胞外情况中的细小囊泡，直径為 30~10瑜珈下腰神器,0 nm[79]；其内含有功效性卵白質、mRNA 及 microRNA 等物資，在细胞間的信息通報進程中阐扬首要感化[80]。外泌體可從多種體液和细胞培育上清液中分手，最遍及利用的分手法子是高速離心與超滤法。比年来發明ADSCs- exo具备與 ADSCs 類似生物活性的發展因子、趋化因子、脂質等多種活性物資[81- 82]，可促成血管内皮的增生。利用血小板衍生的發展因子可促成 ADSCs 開释加强血管發展潜力的外泌體[83]。在骨缺损模子钻研中發明，将外泌體加载于生物支架上，有促成细胞迁徙與归巢，引诱骨再生的感化[84]。干细胞衍生物相较干细胞产物具备以下上風：属于無细胞生物醫治，伦理上輕易接管；同時性子更不乱，易于保留，便于辦理及運输；生物學功效不随時候耽误而衰減；低抗原性，同種异體利用不會引發免疫反响，可能會比干细胞临床轉化更快地走向临床。

六、总结與预测

干细胞作為體内一種具备多向分解能力和排泄能力的细胞，具备增殖能力强、免疫力低的特色。干细胞及其衍生物的醫治是具备首要临床利用远景的再生醫學手腕。在整形修复美容外科范畴颠末了多年的根本與临床钻研證實其在促成皮膚再生與修复、组织血管化、软组织再生、骨與软骨修复、多组织年青化及毛囊再生等多方面均有较好的醫治结果。邱大睿,可是仍需看到干细胞利用中存在的致突變、致瘤等問題并未彻底解决，特别是醫治的尺度化問題未解决，阐明干细胞在醫治疾病中的感化機制、利用法子、平安性和有用性等根本和临床钻研均需進一步完美。

总之，整形修复美容外科范畴干细胞临床利用潜力是庞大的，等待更多的有識之士参加。

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